摘要：

本文對羽絨羽毛微生物中糞鏈球菌的特性、檢測標準以及檢測方法進(jìn)行了綜述，分析了各標準及方法的差異，提出了現代微生物檢測技術(shù)在糞鏈球菌檢測中應用的發(fā)展方向。

關(guān)鍵詞：羽絨羽毛微生物；糞鏈球菌；檢測方法；確證試驗

1 前言

羽絨羽毛及其制品具有輕、柔、暖、抗潮等優(yōu)良特性，備受廣大消費者青睞，具有其他產(chǎn)品不可替代的優(yōu)勢。隨著(zhù)國家改革開(kāi)放和市場(chǎng)經(jīng)濟的持續穩定發(fā)展，我國羽絨羽毛及其制品的進(jìn)出口規模也在不斷擴大。與此同時(shí)，國內外消費者對羽絨羽毛及其制品的要求不僅僅是美觀(guān)舒適，而且更注重衣服的安全性、衛生性和環(huán)保性。特別是2004—2005年全球范圍內禽流感疫情的發(fā)生，使羽絨羽毛及其制品作為動(dòng)物源性產(chǎn)品，其微生物指標成為消費者關(guān)注的問(wèn)題之一[1]。

目前國內外關(guān)于羽絨羽毛微生物檢測標準有FZ/T 80001—2002《水洗羽毛羽絨試驗方法》[2]、GB/T 10288—2003《羽絨羽毛檢驗方法》[3]、SN/T 0475—95《出口商品中糞鏈球菌群檢驗方法》[4]和EN 1884—1999《羽絨羽毛微生物狀態(tài)測定方法》[5]等。涉及的羽絨羽毛微生物檢測指標包括嗜溫性需氧菌、糞鏈球菌、還原亞硫酸梭狀芽孢桿菌、沙門(mén)氏菌等。糞鏈球菌作為其中一項重要檢測指標，是引起產(chǎn)品不合格的主要污染菌。糞鏈球菌為條件致病菌，比沙門(mén)氏菌、致病性大腸桿菌抵抗性及存活率均高，能夠通過(guò)羽絨羽毛及其制品感染人類(lèi)。因此，糞鏈球菌的檢測具有重要意義，可以直接或間接地表明送檢樣品的衛生狀況以及受污染程度，并判斷出該樣品在使用上是否安全[6]。

2 糞鏈球菌特性

糞鏈球菌（又名糞腸球菌）含鏈球菌D群抗原，屬于D群。種系分類(lèi)法證實(shí)D群鏈球菌的腸球菌與鏈球菌同源程度低，Schleifer等于1984年將其命名為腸球菌屬[7]。糞鏈球菌生物學(xué)特性為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈單個(gè)、成對或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長(cháng)的細菌呈球桿狀，液體培養基中呈卵圓形、鏈狀排列，無(wú)芽孢和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛。其培養特性為兼性厭氧，最適生長(cháng)溫度35℃，多數菌株在10℃和45℃均能生長(cháng)，營(yíng)養要求不高。所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長(cháng)，在40%膽汁培養基中能分解七葉苷，不含細胞色素氧化酶和觸酶。DNA的4種堿基中，鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶（DNA GC）所占的比例為37%～45%[8]。糞鏈球菌所致感染最多見(jiàn)于泌尿道感染，是重要的醫院感染病原菌。糞鏈球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴重基礎疾患的老年人、長(cháng)期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者[9]。不同來(lái)源的糞鏈球菌在致病性方面具有許多相似之處。動(dòng)物源性產(chǎn)品很有可能會(huì )成為人腸球菌感染的一個(gè)新途徑[10]。

3 糞鏈球菌檢測方法比較

3.1 糞鏈球菌檢測方法

目前，檢測糞鏈球菌的方法有4種，分別是涂布法、濾膜法、多管法和平板法。對糞鏈球菌的確證試驗有顯微鏡檢查、生化檢驗以及血清試驗3種。各標準中的具體檢測方法及參數如表1所示。

3.2 糞鏈球菌檢測方法分析各標準檢測方法的不同主要有以下兩個(gè)方面：

（1）標準培養方法不同。FZ/T 80001—2002、GB/T 10288—2003和EN 1884—1999標準中細菌培養使用涂布法，該方法適用于細菌含量較高的樣品，特點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快速，可以對微生物進(jìn)行分離并觀(guān)察菌落特征。但在實(shí)際運用中，涂布法的接種量過(guò)少，當遇到細菌含量較低的樣品時(shí)，易因檢出率低，引起假陰性結果，從而誤導檢測人員產(chǎn)生錯誤判定。GB/T 10288—2003、EN 1884—1999以及SN/T 0475—95標準中都提及運用濾膜法，該方法對樣液進(jìn)行抽濾，以將樣品中少量的細菌濃縮集中，適用于檢測細菌含量較低的樣品，特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、快速、準確度高。在遇到樣品中細菌含量較少，涂布法檢出率低的情況下，應采用濾膜法進(jìn)行檢測，以防止漏檢。此外，SN/T0475—95標準中還提到多管法和平板法。多管法適用于細菌量較少的樣品檢測，對檢測人員的專(zhuān)業(yè)判別能力具有一定的要求，缺點(diǎn)則是成本較高，操作繁瑣。平板計數法運

用于細菌量較大的樣品檢測，缺點(diǎn)是此類(lèi)檢測稀釋梯度不夠明確，不能確保單個(gè)菌落形成，不易計數。當采用涂布法或濾膜法對樣品進(jìn)行培養，且細菌含量過(guò)高超過(guò)有效值時(shí)，應當改用平板計數法進(jìn)行。反之細菌含量過(guò)少低于有效值時(shí)，應當改用多管法對其進(jìn)行培養。綜上所述，目前關(guān)于羽絨羽毛糞鏈球菌的檢測標準較多，檢測方法不統一，使得檢驗結果的差異較大。同種樣品因使用不同的檢測方法，其檢測結果完全不同。檢驗人員應結合現行標準中的4種培養方法，根據樣品中細菌含量的多少，針對性地選擇合適的檢測方法，以確保檢驗結果的科學(xué)性和準確性。

（2）標準確證試驗方法不同。標準FZ/T 80001—2002、GB/T 10288—2003和EN 1884—1999中確證試驗使

用顯微鏡鏡檢技術(shù)，該方法是用來(lái)觀(guān)察微生物的形態(tài)，以鑒別糞鏈球菌屬革蘭氏陽(yáng)性球菌。現行大部分標準對于糞鏈球菌鏡檢方面描述模糊，僅GB/T 10288—2003明確提出鏡檢菌屬為革蘭氏染色陽(yáng)性球菌，標準中鏡檢方法的不確定，必然會(huì )導致結果出入。同時(shí)，顯微鏡鏡檢技術(shù)是一種必不可少的初步篩查試驗，可以為下一步的生化和血清學(xué)試驗做鋪墊。如鏡檢結果為陰性則無(wú)需進(jìn)行進(jìn)一步試驗，反之則需進(jìn)一步篩查。現行標準FZ/T 80001—2002、GB/T10288—2003、EN 1884—1999和SN/T 0475—95中僅提到糞鏈球菌D群的血清和生化學(xué)鑒定，無(wú)具體的試驗描述。而生化試驗用于鑒別細菌，尤其對形態(tài)、革蘭氏染色反應和培養特性相同或相似的細菌較為有效。血清學(xué)試驗是根據細菌的抗原、抗體具有高度特異性的原理來(lái)進(jìn)行試驗，用來(lái)鑒定分離到的細菌菌屬，達到最終確認檢測結果的目的。這4個(gè)標準中對于生化試驗和D群血清試驗描述的缺失使該確證方法不統一，缺乏可操作性，易導致檢驗人員遺漏部分關(guān)鍵性試驗，且國內無(wú)商品化診斷血清，需專(zhuān)門(mén)從國外采購，采購周期長(cháng)，保存時(shí)間短，所以國內相關(guān)實(shí)驗室基本不采用該項驗證試驗。

4 羽絨羽毛糞鏈球菌檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢

羽絨羽毛微生物檢測有別于其他產(chǎn)品檢測，它對檢測人員知識的全面性具有更高的要求，任何方面知識的欠缺都可能使監測數據的真實(shí)性和準確性大打折扣[11]。上述方法都僅僅只是傳統的糞鏈球菌培養方法和確證試驗。此類(lèi)試驗缺乏一定的可操作性和準確性，易引起試驗假陽(yáng)性或者假陰性。隨著(zhù)現代科學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，其確證試驗，更傾向于快速準確的非培養檢驗方法。其技術(shù)也已由過(guò)去以表型方法為主轉向結合基因型分析進(jìn)行綜合鑒定。王沛等[12]以臨床標本中的糞腸球菌和屎腸球菌的快速鑒定為研究對象，建立了熒光原位雜交法，結果顯示探針的特異性強，敏感性高。王亞賓等[13]利用超氧化物歧化酶（SodA）基因多態(tài)性涉及種特異性引物，建立了能同時(shí)測定豬源糞腸球菌和屎腸球菌的多重聚合酶鏈式反應（PCR）法，結果顯示該方法具有快速、靈敏、準確和特異性強的特點(diǎn)。適用于基層實(shí)驗室對腸球菌的診斷。林怡雯等[14]以大腸桿菌和糞腸球菌作為研究對象，建立了一種定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）方法，結果顯示該方法能夠很好地應用于實(shí)際水樣中活菌的選擇性檢測。周霞等[15]利用超聲波裂解法制備糞腸球菌裂解物，通過(guò)棋盤(pán)滴定方法篩選最佳反應條件，建立了檢測致羔羊腦炎糞腸球菌抗體的間接酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測方法，結果顯示該方法重復性好、特異性強、準確性高、操作簡(jiǎn)便快速，適用于特異性檢測糞腸球菌。黎滿(mǎn)香等[16]通過(guò)比較腸球菌間編碼核糖體亞基的基因（16S rDNA）的差異，建立了一種基于細菌16Sr DNA的糞腸球菌PCR檢測方法，結果顯示該方法能特異地檢測糞腸球菌，且敏感、簡(jiǎn)易、快捷，適用于特異性檢測糞腸球菌及實(shí)驗室的日常檢測。

以上這些新技術(shù)的研究為羽絨羽毛糞鏈球菌檢測提供了技術(shù)支持，并且在其他領(lǐng)域應用較為廣泛，但要將上述現代微生物檢測技術(shù)完全應用到服裝檢測中，還需進(jìn)一步的研究。

5 結束語(yǔ)

我國羽絨及其制品正處于國際市場(chǎng)競爭激烈階段，吸收并加強羽絨羽毛微生物生產(chǎn)和檢測技術(shù)，這有利于提高我國羽絨及其制品的產(chǎn)品質(zhì)量，促進(jìn)我國羽絨市場(chǎng)的穩定，推動(dòng)我國羽絨行業(yè)的發(fā)展，同時(shí)還能擴大我國羽絨行業(yè)在國際羽絨市場(chǎng)的影響力。目前，我國關(guān)于羽絨羽毛糞鏈球菌的檢測標準較多，檢測方法不統一，使得檢驗結果的差異較大甚至引起假陰性結果，而標準中確證試驗方法無(wú)具體的試驗描述，缺乏可操作性。為進(jìn)一步增強羽絨羽毛糞鏈球菌檢測方法的敏感性和特異性，建議在完善其檢測標準的基礎上，引入熒光原位雜交法、PCR法、ELISA法等快速準確的非培養檢驗方法，有效推進(jìn)羽絨羽毛糞鏈球菌檢測工作的發(fā)展。

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來(lái)源： 中國纖檢雜志

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